Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok nebo roztok PBS

PBS nebo fosfátem pufrovaný fyziologický roztok je pufrový roztok to je zvláště cenné, protože napodobuje koncentraci iontů, osmolaritu a pH tekutin lidského těla. Jinými slovy, je to izotonické k lidským řešením, takže je méně pravděpodobné, že v biologickém, lékařském nebo biochemickém výzkumu způsobí poškození buněk, toxicitu nebo nežádoucí srážení.

Existuje několik receptů na přípravu roztoku PBS. Esenciální roztok obsahuje vodu, hydrogenfosforečnan sodný a chlorid sodný. Některé přípravky obsahují chlorid draselný a dihydrogenfosforečnan draselný. EDTA může být také přidán do buněčných přípravků, aby se zabránilo shlukování.

Fosfátem pufrovaný solný roztok není ideální pro použití v řešeních které obsahují dvojmocné kationty (Fe²⁺, Zn²⁺), protože může dojít ke srážení. Některé roztoky PBS však obsahují vápník nebo hořčík. Také mějte na paměti, že fosfát může inhibovat enzymatické reakce. Zejména si uvědomte tuto potenciální nevýhodu při práci s DNA. Zatímco PBS je vynikající pro fyziologickou vědu, uvědomte si, že fosfát ve vzorku pufrovaném PBS může precipitovat, pokud je vzorek smíchán s ethanolem.

Typické chemické složení 1X PBS má konečnou koncentraci 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl a 2,7 mM KCl. Zde je konečná koncentrace činidel v roztoku:

V závislosti na vašem účelu můžete připravit 1X, 5X nebo 10X PBS. Mnoho lidí jednoduše koupí PBS pufrové tablety, rozpustí je v destilované vodě a upraví pH podle potřeby s kyselinou chlorovodíkovou nebo hydroxid sodný. Je však snadné vytvořit řešení od nuly. Zde jsou recepty na 1X a 10X fosfátem pufrovaný fyziologický roztok:

1. Soli reagencií se rozpustí v 800 ml destilované vody.
2. Upravte pH na požadovanou úroveň kyselinou chlorovodíkovou. Obvykle je to 7,4 nebo 7,2. K měření pH použijte pH metr, nikoli pH papír nebo jinou nepřesnou techniku.
3. Přidejte destilovanou vodu tak, aby byl celkový objem 1 litr.

Pro některé aplikace není nutná sterilizace, ale pokud ji sterilizujete, vydejte roztok do alikvotů a autoklávujte po dobu 20 minut při 15 psi (1,05 kg / cm)²) nebo použijte sterilizaci filtru.

Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok může být uložené při pokojové teplotě. Může být také v chladu, ale může být použit i 5X a 10X roztok po ochlazení se vysráží. Pokud musíte zchlazený koncentrovaný roztok nejprve skladovat při pokojové teplotě, dokud si nejste jisti, že se soli zcela rozpustily. Pokud dojde ke srážení, zahřeje je teplota zpět do roztoku. Skladovatelnost chlazeného roztoku je 1 měsíc.

10X je koncentrovaný nebo zásobní roztok, který může být naředěn na 1X nebo normální roztok. 5X roztok musí být zředěn 5krát, aby se dosáhlo normálního ředění, zatímco 10X roztok musí být zředěn 10krát.

Pro přípravu 1 litrového pracovního roztoku 1X PBS z 10X roztoku PBS přidejte 100 ml 10X roztoku do 900 ml vody. Tím se změní pouze koncentrace roztoku, nikoli gram nebo molární množství reagencií. Hodnota pH by neměla být ovlivněna.

Dalším populárním pufrovacím roztokem je Dulbeccova fosfátem pufrovaný solný roztok nebo DPBS. DPBS, jako PBS, se používá pro biologický výzkum a pufry v rozmezí pH 7,2 až 7,6. Může být skladován při pokojové teplotě. Dulbeccov roztok obsahuje nižší koncentraci fosfátů. Jde o 8,1 mM mM fosfátové ionty, zatímco normální PBS je 10 mM fosfát. Recept na 1x DPBS je:

Soli se rozpustí v 800 ml vody. Upravte pH na 7,2 až 76 pomocí kyseliny chlorovodíkové. Konečný objem se upraví na 1000 ml vodou. Autoklávujte při 121 ° C po dobu 20 minut.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Tvorba plaků a izolace čistých linií viry poliomyelitidy". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• „Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok (PBS.“ Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.