Polymorfismus délky restrikčních fragmentů (RFLP) je molekulární metoda genetické analýzy, která umožňuje identifikaci jednotlivců na základě jedinečných vzorců restrikční enzym řezání ve specifických oblastech DNA.
Tato technologie, také označovaná jako RFLP analýza, využívá výhody polymorfismy v genetických kódech jednotlivých lidí. I když všichni členové druhu mají v zásadě stejný genetický make-up, tyto malé rozdíly způsobují rozdíly ve fenotypu, jako je vzhled nebo metabolismus, mezi jednotlivci.
Technika analýzy RFLP
Technika analýzy RFLP zahrnuje řezání konkrétní oblasti DNA se známou variabilitou, s restrikčními enzymy, pak se fragmenty DNA separují elektroforézou na agarózovém gelu a stanoví se počet fragmentů a relativní velikosti.
Restrikční enzym je enzym, proteinová molekula, která štěpí DNA na restrikčních místech. V podstatě je vzorek DNA rozštěpen a štěpen restrikčními enzymy. Výsledné fragmenty jsou rozděleny podle jejich délek a vzor velikosti fragmentů se bude lišit pro každého jednotlivého testovaného.
Celý proces RFLP vyžaduje značení sondy, fragmentaci DNA, elektroforézu, blotování, hybridizaci, promývání a autoradiografii. Detekovaná RFLP je vizualizována pomocí rentgenového filmu v autoradiografii, kde fragmenty DNA lze prohlížet a analyzovat poté, co jsou od sebe elektroforézou odděleny.
Žádost o použití RFLP
Některé z aplikací pro analýzu RFLP zahrnují:
- Otisky DNA: Forenzní vědci mohou použít RFLP analýzu k identifikaci podezřelých na základě vzorků důkazů shromážděných v místě činu.
- Otcovství: RFLP se také používá při určování otcovství nebo pro sledování předků.
- Genetická rozmanitost: Tuto techniku lze použít ke studiu evoluce a migrace volně žijících živočichů, ke studiu chovných vzorců v populacích zvířat ak detekci a diagnostice určitých chorob.
Technika použití RFLP detekce variace v genomech je životně důležitým nástrojem při mapování genomu a analýze genetických chorob. Pokud je v určitém chromozomu hledáno umístění konkrétního genu nemoci, vědci by analyzovat DNA členů rodiny s touto nemocí a poté hledat podobné vzorce dědičnosti v RFLP alely.
Jakmile je gen onemocnění lokalizován, provedení analýzy RFLP na dalších členech rodiny by mohlo odhalit nosič mutantních genů nebo signalizovat celkové riziko onemocnění. Je důležité si uvědomit, že technika RFLP se dnes široce nepoužívá, protože novější, robustnější techniky se používají pro analýzu DNA ve forenzní vědě a v několika dalších oborech.
Negativní aspekty RFLP
Technika analýzy RFLP je bohužel zdlouhavá a pomalá. Kromě požadavku na velké množství vzorku DNA - vzorek by obvykle musel být asi o velikosti čtvrtiny, což je relativně velké pro vzorky DNA - proces, od značení sondy po praní a autoradiografii, může trvat až celý měsíc do kompletní.
Výsledky projektu Human Genome Project do značné míry nahradily potřebu RFLP. Projekt umožnil stanovení celé sekvence DNA nalezené v lidských buňkách, lidském genomu a identifikaci všech genů v lidském genomu.